Dithiothreitol (DTT) er almennt notað afoxunarefni, einnig þekkt sem nýja græna aukefnið.Það er lítið sameindalífrænt efnasamband með tveimur merkaptanhópum (-SH).Vegna afoxandi eiginleika þess og stöðugleika er DTT mikið notað í lífefnafræði og sameindalíffræðitilraunum.
Meginhlutverk DTT er að draga úr tvísúlfíðtengjum í próteinum og öðrum lífsameindum.Tvísúlfíðtengi er mikilvægur þáttur í próteinbroti og stöðugleika, en við ákveðnar tilraunaaðstæður, svo sem minnkanlega SDS-PAGE greiningu, próteinendurröðun og brjóta saman, er nauðsynlegt að minnka tvísúlfíðtengi í tvo þíólhópa til að afhjúpa staðbundna uppbyggingu próteinið.DTT getur brugðist við tvísúlfíðtengi til að minnka þau í merkaptanhópa, þannig að opna staðbundna uppbyggingu próteinsins og auðvelda greiningu og meðhöndlun.
DTT er einnig hægt að nota til að vernda ensímvirkni og stöðugleika.Í sumum ensímhvötuðum viðbrögðum getur virkni ensímsins minnkað vegna oxunarefnisins.DTT getur hvarfast við oxunarefni til að minnka þau í skaðlaus efni og verndar þannig virkni og stöðugleika ensímsins.
Í samanburði við hefðbundin afoxunarefni eins og β-merkaptóetanól (β-ME), er DTT talið vera öruggara og stöðugra afoxunarefni.Það er ekki aðeins stöðugt í vatnslausn, heldur heldur einnig afoxandi eiginleikum sínum við háan hita og sýru-basa aðstæður.
Notkun DTT er tiltölulega einföld.Almennt er DTT leyst upp í viðeigandi biðminni og síðan bætt við tilraunakerfið.Ákjósanlegasta styrk DTT þarf að ákvarða í samræmi við tiltekna tilraun og er almennt notaður á bilinu 0,1-1mM.Lægri styrkur getur dregið úr skaðlegum áhrifum á frumuvöxt og getur dregið úr frumueiturhrifum vegna oftjáningar markpróteina.Hærri styrkur getur valdið of mikilli efnaskiptaálagi frumna, sem hefur áhrif á frumuvöxt og tjáningu skilvirkni.
Leiðin til að ákvarða ákjósanlegan styrk getur verið að meta tjáningarstig markpróteinsins með því að framkvæma IPTG örvunarpróf við mismunandi styrkleika.Hægt er að framkvæma smærri ræktunarpróf með því að nota margvíslega IPTG styrkleika (td 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, osfrv.) og hægt er að meta tjáningaráhrifin við mismunandi styrk með því að greina tjáningarstig markpróteinsins (td vestrænt flekki eða flúrljómun).Samkvæmt niðurstöðum tilrauna var styrkurinn með bestu tjáningaráhrifin valinn sem ákjósanlegur styrkur.
Að auki geturðu einnig vísað til viðeigandi bókmennta eða reynslu annarra rannsóknarstofa til að skilja almennt notað IPTG styrkleikasvið við svipaðar tilraunaaðstæður og síðan fínstilla og stilla í samræmi við tilraunaþarfir.
Það er mikilvægt að hafa í huga að ákjósanlegur styrkur getur verið mismunandi eftir mismunandi tjáningarkerfum, markpróteinum og tilraunaaðstæðum, svo það er best að hagræða í hverju tilviki fyrir sig.
Í stuttu máli er DTT algengt afoxunarefni sem hægt er að nota til að draga úr tvísúlfíðtengjum í próteinum og öðrum lífsameindum og til að vernda ensímvirkni og stöðugleika.Það hefur verið mikið notað í lífefnafræði og sameindalíffræðitilraunum.
Birtingartími: 28. september 2023