Díþíóþreitól (DTT) er algengt afoxunarefni, einnig þekkt sem nýja græna aukefnið. Það er lítil sameinda lífrænt efnasamband með tveimur merkaptanhópum (-SH). Vegna afoxunareiginleika sinna og stöðugleika er DTT mikið notað í lífefnafræði og sameindalíffræðitilraunum.
Meginhlutverk DTT er að draga úr tvísúlfíðtengjum í próteinum og öðrum líffræðilegum sameindum. Dísúlfíðtengið er mikilvægur þáttur í próteinbrotningu og stöðugleika, en við ákveðnar tilraunaaðstæður, svo sem afoxanleg SDS-PAGE greiningu, endurröðun og brotningu próteina, er nauðsynlegt að draga úr tvísúlfíðtenginu í tvo þíólhópa til að afhjúpa rúmfræðilega uppbyggingu próteinsins. DTT getur brugðist við tvísúlfíðtengjum til að draga þau úr í merkaptanhópa, og þannig opnað rúmfræðilega uppbyggingu próteinsins og gert það auðvelt að greina og meðhöndla.
DTT má einnig nota til að vernda virkni og stöðugleika ensíma. Í sumum ensímhvataðum efnahvörfum getur oxunarefnið dregið úr virkni ensímsins. DTT getur brugðist við oxunarefnum og minnkað þau í skaðlaus efni og þar með verndað virkni og stöðugleika ensímsins.
Í samanburði við hefðbundin afoxunarefni eins og β-merkaptoetanól (β-ME) er DTT talið öruggara og stöðugra afoxunarefni. Það er ekki aðeins stöðugt í vatnslausn heldur viðheldur einnig afoxunareiginleikum sínum við hátt hitastig og sýru-basa aðstæður.
Notkun DTT er tiltölulega einföld. Almennt er DTT leyst upp í viðeigandi stuðpúða og síðan bætt út í tilraunakerfið. Ákjósanlegur styrkur DTT þarf að ákvarða í samræmi við tiltekna tilraun og er almennt notaður á bilinu 0,1-1 mM. Lægri styrkur getur dregið úr skaðlegum áhrifum á frumuvöxt og getur dregið úr frumueituráhrifum vegna ofurtjáningar markpróteina. Hærri styrkur getur valdið óhóflegri efnaskiptabyrði frumna, sem hefur áhrif á frumuvöxt og tjáningarhagkvæmni.
Leiðin til að ákvarða kjörþéttni getur verið að meta tjáningarstig markpróteinsins með því að framkvæma IPTG örvunarprófanir við mismunandi styrk. Hægt er að framkvæma smáræktunarprófanir með því að nota fjölbreytt IPTG styrk (t.d. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, o.s.frv.) og tjáningaráhrif við mismunandi styrk er hægt að meta með því að greina tjáningarstig markpróteinsins (t.d. Western blot eða flúrljómunargreining). Samkvæmt tilraunaniðurstöðum var styrkurinn með bestu tjáningaráhrifunum valinn sem kjörþéttni.
Að auki er einnig hægt að vísa til viðeigandi ritrýndra heimilda eða reynslu annarra rannsóknarstofa til að skilja algengt IPTG-styrkbil við svipaðar tilraunaaðstæður og síðan fínstilla og aðlaga í samræmi við tilraunaþarfir.
Mikilvægt er að hafa í huga að kjörþéttni getur verið breytileg eftir mismunandi tjáningarkerfum, markpróteinum og tilraunaskilyrðum, þannig að best er að fínstilla í hverju tilviki fyrir sig.
Í stuttu máli er DTT algengt afoxunarefni sem hægt er að nota til að draga úr tvísúlfíðtengjum í próteinum og öðrum lífsameindum og til að vernda ensímvirkni og stöðugleika. Það hefur verið mikið notað í lífefnafræðilegum og sameindalíffræðilegum tilraunum.
Birtingartími: 28. september 2023