Hvernig á að ákvarða ákjósanlegan styrk?
Fyrir IPTG-hvatann (ísóprópýl-beta-d-þíógalaktósíð), því meiri styrkur, því betra.Ákjósanlegur styrkur fer eftir sérstökum tilraunaaðstæðum og æskilegum örvunaráhrifum.
Almennt er styrkur IPTG notaður á bilinu 0,1-1 mM.Lægri styrkur getur dregið úr skaðlegum áhrifum á frumuvöxt og getur dregið úr frumueiturhrifum vegna oftjáningar markpróteina.Hærri styrkur getur valdið of mikilli efnaskiptaálagi frumna, sem hefur áhrif á frumuvöxt og tjáningu skilvirkni.
Leiðin til að ákvarða ákjósanlegan styrk getur verið að meta tjáningarstig markpróteinsins með því að framkvæma IPTG örvunarpróf við mismunandi styrkleika.Hægt er að framkvæma smærri ræktunarpróf með því að nota margvíslega IPTG styrkleika (td 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, osfrv.) og hægt er að meta tjáningaráhrifin við mismunandi styrk með því að greina tjáningarstig markpróteinsins (td vestrænt flekki eða flúrljómun).Samkvæmt niðurstöðum tilrauna var styrkurinn með bestu tjáningaráhrifin valinn sem ákjósanlegur styrkur.
Að auki geturðu einnig vísað til viðeigandi bókmennta eða reynslu annarra rannsóknarstofa til að skilja almennt notað IPTG styrkleikasvið við svipaðar tilraunaaðstæður og síðan fínstilla og stilla í samræmi við tilraunaþarfir.
Það er mikilvægt að hafa í huga að ákjósanlegur styrkur getur verið mismunandi eftir mismunandi tjáningarkerfum, markpróteinum og tilraunaaðstæðum, svo það er best að hagræða í hverju tilviki fyrir sig.
Birtingartími: 28. september 2023