Hvernig á að ákvarða bestu styrkleika?
Fyrir örvunarefnið IPTG (ísóprópýl-beta-d-þíógalaktósíð) gildir að því hærri sem styrkurinn er, því betra. Kjörstyrkurinn fer eftir tilteknum tilraunaskilyrðum og æskilegum örvunaráhrifum.
Almennt er styrkur IPTG notaður á bilinu 0,1-1 mM. Lægri styrkur getur dregið úr skaðlegum áhrifum á frumuvöxt og getur dregið úr frumueituráhrifum vegna ofurtjáningar markpróteina. Hærri styrkur getur valdið óhóflegri efnaskiptabyrði frumna, sem hefur áhrif á frumuvöxt og tjáningargetu.
Leiðin til að ákvarða kjörþéttni getur verið að meta tjáningarstig markpróteinsins með því að framkvæma IPTG örvunarprófanir við mismunandi styrk. Hægt er að framkvæma smáræktunarprófanir með því að nota fjölbreytt IPTG styrk (t.d. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, o.s.frv.) og tjáningaráhrif við mismunandi styrk er hægt að meta með því að greina tjáningarstig markpróteinsins (t.d. Western blot eða flúrljómunargreining). Samkvæmt tilraunaniðurstöðum var styrkurinn með bestu tjáningaráhrifunum valinn sem kjörþéttni.
Að auki er einnig hægt að vísa til viðeigandi ritrýndra heimilda eða reynslu annarra rannsóknarstofa til að skilja algengt IPTG-styrkbil við svipaðar tilraunaaðstæður og síðan fínstilla og aðlaga í samræmi við tilraunaþarfir.
Mikilvægt er að hafa í huga að kjörþéttni getur verið breytileg eftir mismunandi tjáningarkerfum, markpróteinum og tilraunaskilyrðum, þannig að best er að fínstilla í hverju tilviki fyrir sig.
Birtingartími: 28. september 2023