Það eru margir ósungnir hetjur í kringum okkur, sem virðast vera venjulegir, en í raun leggja þeir mikið af mörkum til okkar í hljóði. Próteinasi K er „ósungni hetjan“ í sameindagreiningariðnaðinum, þó að í samanburði við „stóru og öflugu“ í greininni sé próteinasi K svo lágstemmdur að við höfum lengi gleymt mikilvægi þess. Með uppkomu nýrrar krónufaraldurs hefur eftirspurn eftir próteinasa K aukist gríðarlega og framboð heima og erlendis er langt á eftir neyslunni og allir áttuðu sig skyndilega á því að próteinasi K er svo mikilvægur.
Hver er notkun próteinasa K?
Próteinasi K er serínpróteasi með próteinkljúfandi ensímvirkni og getur viðhaldið virkni í fjölbreyttu umhverfi (pH (4-12,5), saltlausn, hátt hitastig 70°C, o.s.frv.). Þar að auki er virkni próteinasa K ekki hamluð af SDS, þvagefni, EDTA, gúanidínhýdróklóríði, gúanidínísóþíósýanati, o.s.frv., og ákveðið magn af þvottaefni getur einnig aukið virkni próteinasa K. Í læknisfræðilegri meðferð (sótthreinsun veira og örvera), matvælum (mýkingu kjöts), leðri (mýkingu hárs), vínframleiðslu (hreinsun áfengis), amínósýruframleiðslu (niðurbrotnar fjaðrir), kjarnsýruútdrætti, in situ blendingum, o.s.frv., eru til notkunarsvið fyrir próteinasa K. Algengasta notkunin er kjarnsýruútdráttur.
Próteinasi K getur ensímbrotið alls kyns prótein í sýninu, þar á meðal þau histón sem eru fastbundin kjarnsýrum, þannig að kjarnsýrurnar losna úr sýninu og út í útdráttinn, sem auðveldar næsta skref útdráttar og hreinsunar. Við greiningu á kjarnsýrum veirunnar er próteinasi K einn mikilvægasti þátturinn í sýnatökulausn veirunnar. Próteinasi K getur brotið niður og óvirkjað hjúpprótein veirunnar, sem er öruggara á flutnings- og greiningarstigi; auk þess getur próteinasi K einnig brotið niður RNasa, sem kemur í veg fyrir niðurbrot veiru-RNA og auðveldar greiningu kjarnsýru.
Frægð próteinasa K varð yfir nótt
Hvort sem um er að ræða vísindarannsóknir eða í gegnum innvortis sjúkdóma (IVD), þá er kjarnsýruútdráttur einfaldasta tilraunin, þannig að próteinasi K hefur alltaf verið mjög mikilvægur. Hins vegar var próteinasi K áður fyrr mun minna þekktur en hlutverk hans. Þetta var að miklu leyti vegna þess að framboð og eftirspurn eftir próteinasa K var mjög stöðug. Fáir myndu halda að framboð á próteinasa K yrði vandamál.
Með uppkomu nýja krónufaraldursins hefur eftirspurn eftir kjarnsýruprófum aukist gríðarlega. Í lok júní 2020 hafði Kína lokið næstum 90 milljón nýjum krónuprófum og þessi tala er enn ógnvekjandi á heimsvísu. Í tilraunum með kjarnsýruútdrátt er vinnuþéttni próteinasa K um 50-200 µg/ml. Almennt þarf um 100 µg af próteinasa K til að vinna sýni af kjarnsýru. Í raunverulegri notkun, til að auka skilvirkni kjarnsýruútdráttar, er próteinasa K oft notað í auknu magni. Greining kjarnsýru á nýju kórónuveirunni hefur leitt til mikillar eftirspurnar eftir próteinasa K. Upphaflegt jafnvægi milli framboðs og eftirspurnar eftir próteinasa K rofnaði fljótt og próteinasa K varð mikilvægt efni til að koma í veg fyrir faraldur á einni nóttu.
Erfiðleikar við framleiðslu próteinasa K
Þó að fólk hafi metið mikilvægt gildi próteinasa K mikils með þróun faraldursins, er það vandræðalegt að vegna þess hve lítið er notað til próteinasa K, hafa fá innlend fyrirtæki tekið þátt í framleiðslu á próteinasa K. Þegar fólk vildi koma á fót próteinasa K framleiðslu kom í ljós í framleiðsluferlinu að próteinasa K er afar sérstakt prótein. Það er afar krefjandi að auka framleiðslugetu próteinasa K á stuttum tíma.
Stórfelld framleiðsla á próteinasa K stendur frammi fyrir eftirfarandi erfiðleikum
1. Lítil tjáning
Próteinasi K getur brotið niður flest prótein á ósértækan hátt og valdið alvarlegum eituráhrifum á tjáningarfrumuna. Þess vegna er tjáningarstig próteinasa K almennt mjög lágt. Skimun á tjáningarkerfum og stofnum sem tjá próteinasa K í mikilli mæli krefst almennt lengri ferlis.
2. Leifar af litarefnum og kjarnsýrum
Stórfelld gerjun leiðir til mikils magns af litarefnum og kjarnsýruleifum hýsilsins. Erfitt er að fjarlægja þessi óhreinindi með einföldu hreinsunarferli og flókin hreinsun eykur kostnað og dregur úr endurheimtarhraða.
3. Óstöðugleiki
Próteinasi K er ekki nógu stöðugt, það getur ensímbrotnað sjálft og erfitt er að geyma það stöðugt við 37°C í langan tíma án verndarefnis.
4. Auðvelt að fella út
Þegar frystþurrkað próteinasa K duft er útbúið, til að tryggja að fast efnisinnihald próteinasa K í frystþurrkaða duftinu sé hátt, er nauðsynlegt að bæta við frostþurrkuðu verndarefni í miklum styrk, en þegar styrkur próteinasa K nær 20 mg/ml eða meira er auðvelt að mynda botnfall, sem veldur miklum erfiðleikum við frostþurrkun próteinasa K með hátt fast efnisinnihald.
5. Stór fjárfesting
Próteinasi K hefur sterka próteasavirkni og getur vatnsrofið önnur próteasa í rannsóknarstofum. Þess vegna krefst próteinasi K sérhæfðra framleiðslusvæða, búnaðar og starfsfólks fyrir rannsóknir, þróun og framleiðslu.
Próteinasa K lausn frá XD BIOCHEM
XD BIOCHEM býr yfir þroskuðum próteintjáningar- og hreinsunarvettvangi og hefur mikla reynslu af tjáningu og hreinsun endurröðunarpróteina og hagræðingu framleiðsluferla. Með hraðri myndun rannsóknar- og þróunarteymisins hefur verið sigrast á stórfelldum framleiðsluferlum próteinasa K. Mánaðarleg framleiðsla á frystþurrkuðu dufti er meira en 30 kg. Varan hefur stöðuga afköst, mikla ensímsértæka virkni og engar cýtókróm- og kjarnsýruleifar hýsilsins. Velkomið að hafa samband við XD BIOCHEM. Fáðu prufuútgáfu (Netfang:sales@xdbiochem.comSími: +86 513 81163739).
Tæknilegar lausnir XD BIOCHEM fela í sér
Með því að nota fjölafrit af plasmíðum eru valdir stofnar með mikla tjáningu og tjáningarstig 8g/L, sem vinnur bug á vandamálinu með lágt tjáningarstig próteinasa K.
Með því að koma á fót fjölþrepa hreinsunarferli var hægt að fjarlægja cýtókróm hýsilsins og kjarnsýruleifar próteinasa K undir staðalgildi.
Með mikilli afköstum í skimun verndandi stuðpúðaformúlna var valinn stuðpúði sem getur geymt próteinasa K stöðugt við 37°C.
Skimunarlausnir vinna bug á þeim vanda að próteinasi K safnast auðveldlega saman og fellur út við mikinn styrk og leggja grunninn að frostþurrkun próteinasa K með miklu föstu efni.
XD BIOCHEM próteinasa K sýni
Stöðugleikapróf á XD BIOCHEM próteinasa K: engin marktæk breyting verður á virkni eftir 80 daga við stofuhita
Stöðugleikapróf á XD BIOCHEM próteinasa K: engin marktæk breyting verður á virkni eftir 80 daga við stofuhita.
Samanburður á áhrifum XD BIOCHEM próteinasa K á kjarnsýruútdrátt og samkeppnisafurða. Í ferlinu við kjarnsýruútdrátt eru XD BIOCHEM og samkeppnisafurð próteinasa K notuð, talið í sömu röð. Útdráttarhagkvæmni XD BIOCHEM próteinasa K er hærri og Ct gildi markgensins er lægra.
Birtingartími: 31. des. 2021